Maksatly ulanmak
Adam seriýasynda Monkeypox Wirusyny ýa-da real wagt PCR ulgamlaryny ulanyp lezion eksudat nusgalaryny ýüze çykarmak üçin ulanylýar.
Synag ýörelgesi
Bu önüm floresan zond esasly Taqman® real wagt PCR analiz ulgamy.Specörite desgalar we zondlar Monkeypox Wirusynyň F3L genini tapmak üçin niýetlenendir.Adam tarapyndan goralýan geni nyşana alýan içerki gözegçilik, ýalňyş-negatiw netijelerden gaça durmak üçin nusga ýygnamagyna, nusga işleýşine we real wagt PCR prosesine gözegçilik edýär.Kitap Monkeypox Wirusyny ýüze çykarmak üçin zerur materiallary öz içine alýan doly premiks lyofilizirlenen ulgamdyr: nuklein kislotasyny güýçlendiriji ferment, UDG fermenti, reaksiýa buferi, ýörite primer we zond.
Komponentler | Bukja | Goşundy |
Maýmyn wirusyLýofilizirlenen premiks | 8 zolakly PCR turbalary× 6 halta | Astarlar, zondlar, dNTP / dUTP garyndysy, Mg2 +, Taq DNK polimeraza, UDG fermenti |
MPV oňyn gözegçilik | 400 μL × 1 turba | Maksat genini öz içine alýan DNK yzygiderliligi |
MPV negatiw gözegçilik | 400 μL × 1 turba | Adamyň gen segmentini öz içine alýan DNK yzygiderliligi |
Çözüw | 1 ml × 1 turba | Durnuklaýjy |
Gabat geliş şahadatnamasy | 1 bölek | / |
1. MysalCollectionygyndy:Nusgalar steril turbalara laýyklykda ýygnalmalydyr
standart tehniki aýratynlyklary bilen.
2. Reagent taýýarlygy (Reagent taýýarlyk meýdany)
Kitabyň böleklerini çykaryň, garaşmak üçin otag temperaturasynda deňleşdiriň.
3. Nusga gaýtadan işlemek (nusga gaýtadan işlemek meýdany)
3.1 Nuklein kislotasyny çykarmak
Wirus DNK çykarmak toplumlarynyň degişli talaplaryna we proseduralaryna laýyklykda 200μL suwuk nusgalary, nuklein kislotasyny çykarmak üçin oňyn gözegçilik we negatiw gözegçilik almak maslahat berilýär.
3.2 Lýofilizirlenen poroşok eräp, şablon goşulmagy
Monkeypox wirusy Lyofilizirlenen premiks, nusgalaryň sanyna görä taýýarlaň.Bir nusga, Lyofilizirlenen premiks tozy bolan bir PCR turba gerek.Ativearamaz gözegçilik we polo positiveitel gözegçilik iki nusga hökmünde garalmalydyr.
.
.
(3) Eger ýüze çykarmak üçin umumy Real-wagt PCR guralyny ulanýan bolsaňyz, PCR turbalaryny güýçlendirme meýdanyna gönüden-göni geçiriň;ýüze çykarmak üçin BTK-8 ulanýan bolsaňyz, aşakdaky amallary ýerine ýetirmeli: PCR turbasyndan 10 μL suwuklygy BTK-8 reaksiýa çip guýusyna geçiriň.Bir PCR turbasy çipdäki bir guýa gabat gelýär.Geçirijiniň işleýşi wagtynda turbanyň dikligine 90 dereje bolmagyny üpjün ediň.Aerozol barýer turbasynyň uçlary orta güýç bilen guýynyň ortasyna ýerleşdirilmelidir we ilkinji dişli ýetende (köpürjiklerden gaça durmak üçin) turbany basmagy bes etmeli.Guýular doldurylandan soň, ähli guýulary ýapmak üçin reaksiýa çip membranasyny çykaryň we çip güýçlendiriş kesgitleýiş ýerine geçirilýär.
4. PCR güýçlendirmek (kesgitlemek meýdany)
4.1 PCR turbalaryny / reaksiýa çipini reaksiýa tankyna salyň we her reaksiýanyň atlaryny degişli tertipde düzüň.
4.2 Detüze çykarylýan floresan sazlamalary: (1) Maýmyn wirusy (FAM);(2) Içerki gözegçilik (CY5).
4.3 Aşakdaky welosiped protokolyny işlediň
ABI7500 teswirnamasy, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
Dimler | Temperatura | Wagt | Sikller | |
1 | Denaturasiýa | 95 ℃ | 2 min | 1 |
2 | Denaturasiýa | 95 ℃ | 10 s | 45 |
Annealing, giňeltmek, floresan almak | 60 ℃ | 30 s |
BTK-8 teswirnamasy:
Dimler | Temperatura | Wagt | Sikller | |
1 | Denaturasiýa | 95 ℃ | 2 min | 1 |
2 | Denaturasiýa | 95 ℃ | 5 s | 45 |
Annealing, giňeltmek, floresan almak | 60 ℃ | 14 s |
5. Netijeleriň derňewi (Gural ulanyjy gollanmasyna serediň)
Reaksiýadan soň netijeler awtomatiki ýagdaýda saklanar.Derňemek üçin "Analiz" düwmesine basyň we gural netije sütüninde her nusganyň Ct bahalaryny awtomatiki düşündirer.Negativearamaz we oňyn gözegçilik netijeleri aşakdaky "6. Hil gözegçiligi" -e laýyk gelmelidir.
6. Hil barlagy
6.1 ativearamaz gözegçilik: FAM kanalynda Ct ýa-da Ct> 40 ýok, adaty güýçlendirme egrisi bilen CY5 kanalynda Ct≤40.
6.2 Oňyn gözegçilik: Adaty güýçlendirme egrisi bilen FAM kanalynda Ct≤35, adaty güýçlendirme egrisi bilen CY5 kanalynda Ct≤40.
6.3 aboveokardaky kriteriýalaryň hemmesi ýerine ýetirilen halatynda netije dogry bolar.Otherwiseogsam, netije nädogry.
Netije düşündiriş
Aşakdaky netijeler mümkin:
FAM kanalynyň Ct bahasy | CY5 kanalynyň Ct bahasy | Düşündiriş | |
1# | Ct ýa-da Ct> 40 ýok | ≤40 | Maýmyn wirusy negatiw |
2# | ≤40 | Islendik netije | Maýmyn wirusy polo positiveitel |
3# | 40 ~ 45 | ≤40 | Gaýtadan synag;henizem 40 ~ 45 bolsa, 1 # diýip hasabat beriň |
4# | Ct ýa-da Ct> 40 ýok | Ct ýa-da Ct> 40 ýok | Nädogry |
Bellik: Nädogry netije ýüze çyksa, nusgany ýygnamaly we gaýtadan barlamaly.
Haryt ady | Pişik..Ok | Ölçegi | Mysal | Ýaramlylyk möhleti | Trans.& Sto.Temp. |
Maýmyn wirusynyň hakyky wagty PCR toplumy | B001P-01 | 48 synag / toplum | Serum / lezion eksudaty | 12 aý | -25 ~ -15 ℃ |